松叶面抗虫共生工程菌的构建

doi:10.11707/j.1001-7488.20050420

林业科学 ›› 2005, Vol. 41 ›› Issue (4): 118-122.doi: 10.11707/j.1001-7488.20050420

松叶面抗虫共生工程菌的构建

赵同海¹ 徐静² 徐红梅³ 张青文² 陈京元³

1.中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所,北京100091；中国农业大学昆虫学系,北京100094；2.湖北省林业科学研究院森林保护研究所,3.武汉430079；

收稿日期:2003-09-18 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-07-25 发布日期:2005-07-25

Construction of A Pine Needle Symbiotic Engineered Bacterium Exhibiting the Insecticidal Activity to Dendrolimus punctatus

Zhao Tonghai¹,Xu Jing²,Xu Hongmei³,Zhang Qingwen²,Chen Jingyuan³

1.Institute of Forest Ecology, Environment and Protection, CAF Beijing 100091; 2. Department of Entomology, China Agricultural University Beijing10094; 3.Institute of Forest Protection, Hubei Academy of Forestry Wuhan430079

Received:2003-09-18 Revised:1900-01-01 Online:2005-07-25 Published:2005-07-25

摘要/Abstract

摘要：

将来自Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki的杀虫基因cryIAc通过综合质粒载体pEG601,整合到松树共生细菌B.cereus(Bc752)的染色体上,得到的工程菌对马尾松毛虫幼虫有明显的杀虫活性。此综合质粒含有能在营养期表达BtcryIAc基因的强启动子、cryIAc杀虫基因、四环素抗性标记基因tet^r、8.0kb的EcoRI-NcoⅠB.cereus(O147)染色体片段。将综合质粒通过电击导入Bc752中,综合质粒与Bc752染色体发生同源重组,将BtcryIAc基因整合到Bc752的染色体上。通过对转化子的DNA酶切分析、PCR扩增、SDS-PAGE凝胶电泳检测、Westernblot、电镜观察、毒力测定,结果表明BtcryIAc基因已经整合到松树共生细菌Bc752的染色体上,并可高效表达。

关键词: 苏云金芽孢杆菌, 杀虫蛋白, 松叶面共生菌, 工程菌, 马尾松毛虫

Abstract:

Bt cryIAc gene from Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki was introduced into the chromosome of pine symbiotic bacterium Bacillus cereus (Bc752) by an integrative vector pEG601. The vector contains a strong vegetative promoter, the cryIAc gene (identified as a 7.4 kb SphI-NruI fragment of DNA from B. thuringiensis HD-73), the tetracycline resistance gene (tet^r) and an 8.0 kb EcoRI-NcoI fragment of chromosomal DNA from Bc752 to allow for homologous recombinant between the vector and the bacterial chromosome. Transformation of Bc752 with plasmid pEG601 by electroporation resulted in the engineered symbiotic bacteria. Insertion of the vector DNA into the chromosome was demonstrated by analysis of DNA restriction enzymes and PCR amplification. Recombination strains containing Bt cryIAc gene produced the 133ku protoxin which could be detected by SDS-PAGE, ELISA, electronmicroscope observation and insect bioassays.

Key words: Bacillus thuringiensis(Bt), insecticidal protein, pine needle symbiotic bacteria, engineered bacterium, Dendrolimus punctatus

赵同海徐静徐红梅张青文陈京元. 松叶面抗虫共生工程菌的构建[J]. 林业科学, 2005, 41(4): 118-122.

Zhao Tonghai;Xu Jing;Xu Hongmei;Zhang Qingwen;Chen Jingyuan. Construction of A Pine Needle Symbiotic Engineered Bacterium Exhibiting the Insecticidal Activity to Dendrolimus punctatus[J]. Scientia Silvae Sinicae, 2005, 41(4): 118-122.

[1]	杜会聪,王瑶,方加兴,张珍荫,张苏芳,刘福,张真,孔祥波. 马尾松毛虫线粒体全基因组的测定与分析[J]. 林业科学, 2019, 55(12): 162-172.
[2]	刘高强魏美才. 马尾松毛虫幼虫蛋白质的提取及产品营养和安全评价*[J]. 林业科学, 2008, 44(9): 101-105.
[3]	刘高强魏美才刘卫星. 从马尾松毛虫蛹中制备甲壳素和壳聚糖[J]. 林业科学, 2008, 44(3): 107-112.
[4]	邓文红 沈应柏 李镇宇. 马尾松毛虫取食、茉莉酸甲酯和萜烯混合物处理对马尾松18种氨基酸含量的影响*[J]. 林业科学, 2008, 44(10): 69-75.
[5]	翁宏飚牛宝龙何丽华蒋平孟智启. 浙江马尾松毛虫不同地理种群间基因差异的ISSR分析[J]. 林业科学, 2008, 44(1): 164-168.
[6]	张真;李典谟. 马尾松毛虫暴发机制分析[J]. 林业科学, 2008, 44(1): 140-150.
[7]	黄金水汤陈生何学友许耀昌吴寿德. 白僵菌超低容量油剂防治马尾松毛虫效果[J]. 林业科学, 2003, 39(zk): 194-197.
[8]	赵成华阎云花. 马尾松针叶中的挥发物质对马尾松毛虫产卵行为的影响[J]. 林业科学, 2003, 39(6): 91-93.
[9]	李长友袁强张永安戴莲韵黄大昉. 我国不同森林立地带Bt分离株杀虫晶体蛋白及基因分析[J]. 林业科学, 2002, 38(3): 102-105.
[10]	宋漳江英成. 应用磁化水深层培养绿僵菌液生分生孢子初探[J]. 林业科学, 2001, 37(zk): 177-180.
[11]	宋漳. 液体深层培养绿僵菌分生孢子的研究[J]. 林业科学, 2001, 37(5): 134-139.
[12]	朱光旦林军沈中建钟江陈昌洁. 马尾松毛虫质型多角体病毒单克隆抗体的制备和应用[J]. , 1999, 35(1): 60-65.
[13]	戴莲韵. 苏云金芽孢杆菌菌种保藏[J]. , 1996, 32(6): 516-521.
[14]	王常禄江国华何庆全陈雁. 马尾松毛虫二、三代分化规律的初步研究[J]. , 1995, 31(6): 559-564.
[15]	赵成华伍德明阎云花李群. 马尾松针叶中挥发性成分的鉴定及其对马尾松毛虫的触角电位反应[J]. , 1995, 31(2): 125-131.

松叶面抗虫共生工程菌的构建

Construction of A Pine Needle Symbiotic Engineered Bacterium Exhibiting the Insecticidal Activity to Dendrolimus punctatus

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

作者中心

期刊获奖

引证指标

联系方式