杜仲橡胶颗粒结合蛋白的分离、纯化及抗体制备

doi:10.11707/j.1001-7488.20030404

林业科学 ›› 2003, Vol. 39 ›› Issue (4): 23-29.doi: 10.11707/j.1001-7488.20030404

杜仲橡胶颗粒结合蛋白的分离、纯化及抗体制备

王敏杰¹ 韩玉珍² 刘卫平³ 傅永福⁵ 赵德刚⁴

中国农业大学生物学院植物生理学与生物化学国家重点实验室,北京100094；贵州大学农业生物工程重点实验室,贵阳550025

收稿日期:2001-10-10 修回日期:1900-01-01 出版日期:2003-07-25 发布日期:2003-07-25

ISOLATION, PURIFICATION AND ANTIBODY RAISING OF RUBBER PARTICLE BINDING PROTEINS FROM EUCOMMIA ULMOIDES

Wang Minjie¹,Han Yuzhen²,Liu Weiping³,Fu Yongfu⁵,Zhao Degang⁴

State Key Laboratory of Plant Physiology and Biochemistry, College of Biological Sciences, China Agricultural University Beijing100094;Agricultural Bioengineering Key Laboratory, Guizhou University Guiyang550025

Received:2001-10-10 Revised:1900-01-01 Online:2003-07-25 Published:2003-07-25

摘要/Abstract

摘要：

采用重复漂洗离心法分离纯化了杜仲橡胶颗粒,SDS_PAGE分析发现杜仲橡胶颗粒含有十几种蛋白,其中以56ku、30ku 2种蛋白的丰度较高,分别称之为EuRPP₅₆ 和EuRPP₃₀ 。对杜仲雌雄株的比较表明,杜仲雌株叶片、雌株树皮及果皮中橡胶颗粒蛋白均是EuRPP₃₀ 含量高于EuRPP₅₆ ,而雄株叶片、雄株树皮中正相反。进一步分离纯化了杜仲橡胶颗粒中丰度较高的30ku蛋白,并制备了该蛋白的抗体。免疫细胞化学分析结果表明,在叶片的含胶细胞中有阳性反应,而其它细胞无阳性反应。以上工作为研究杜仲胶粒结合蛋白功能以及阐明杜仲胶生物合成机制奠定基础

关键词: 杜仲, 橡胶颗粒结合蛋白, 抗体制备

Abstract:

Rubber particles were isolated from Eucommia ulmoides by repeated centrifuging and washing. The results of SDS-PAGE analysis showed that more than 10 proteins associated with E. ulmoides rubber particles, among which 56 ku and 30 ku proteins were more in abundance, we named them EuRPP₅₆ and EuRPP₃₀. The expression of rubber particle proteins was not the same in male and female. In female EuRPP₃₀ was more abundant than EuRPP₅₆ , while in male, EuRPP₅₆ was more abundant than EuRPP₃₀. EuRPP₃₀ was prepared and purified. We raised the antibody against EuRPP₃₀. Immunofluorecent experiments showed that the gutta_containing cells could be stained. These works laid the foundation for studying the function of the rubber particle binding proteins as well as probing into the mechanism of E. ulmoides rubber biosynthesis.

Key words: Eucommia ulmoides, Rubber particle binding protein, Antibody raising

王敏杰韩玉珍刘卫平傅永福赵德刚. 杜仲橡胶颗粒结合蛋白的分离、纯化及抗体制备[J]. 林业科学, 2003, 39(4): 23-29.

Wang Minjie;Han Yuzhen;Liu Weiping;Fu Yongfu;Zhao Degang. ISOLATION, PURIFICATION AND ANTIBODY RAISING OF RUBBER PARTICLE BINDING PROTEINS FROM EUCOMMIA ULMOIDES[J]. Scientia Silvae Sinicae, 2003, 39(4): 23-29.

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