林业科学 ›› 2004, Vol. 40 ›› Issue (4): 58-62.doi: 10.11707/j.1001-7488.20040410
安新民 张上隆 徐昌杰 陶俊
An Xinmin,Zhang Shanglong,Xu Changjie,Tao Jun
摘要:
分析植物液泡和细胞壁酸性转化酶基因的保守区序列,设计2对PCR引物,以温州蜜柑基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出长分别为741bp(A)和524bp(B)的2个DNA片段,克隆入pUCm-T载体测序,序列已在GenBank中登记(登记号分别为AY029481和AF332881)。在GenBank中进行同源性检索,结果表明片段A编码的氨基酸与植物液泡酸性转化酶同源性较高,与胡萝卜、马铃薯和番茄同源性分别为79%、79%和78%。片段B编码的氨基酸序列与草莓、拟南芥和豌豆细胞壁转化酶同源性分别为78%、78%和77%。推测A和B分别定位于液泡和细胞壁。运用Clustalx和Bioedit软件包对已获得的柑桔转化酶基因家族的7个基因序列进行分析,结果表明7个基因分属转化酶基因家族的4种类型。推测A和B为2个新成员,分别属于柑桔液泡酸性转化酶基因Ⅱ型(CUAI2)和细胞壁酸性转化酶基因Ⅱ型(CUCWI)。Southern杂交结果表明,CUCWI和CSCWI 2个探针有时会出现较弱的杂交干扰信号,可采用CSCWI与CUCWI同源性较低的另一段序列制作探针进行杂交,也可通过缩短杂交时间、提高杂交和洗膜的温度以及降低洗膜SSC的浓度等措施来降低;其它成员之间无干扰信号产生