林业科学 ›› 2010, Vol. 46 ›› Issue (4): 43-48.doi: 10.11707/j.1001-7488.20100407
唐征1 杨凯2 冯永庆1 曹庆芹2 沈元月1 秦岭1
Tang Zheng1,Yang Kai2,Feng Yongqing1,Cao Qingqin2,Shen Yuanyue1,Qin Ling1
摘要:
利用 RACE 技术从板栗短雄花序突变体中扩增得到 660 bp 的板栗脂质转运蛋白(lipid transfer protein,LTP)cDNA 片段。该 cDNA 编码 118 个氨基酸,具有 8 个位置保守的半胱氨酸(C)残基及 26 个氨基酸的信号肽,它与棉花、草莓脂质转运蛋白氨基酸序列相似性为 63%,基因序列已提交数据库(GenBank),其登录号分别为 FJ490676(基因)和 ACL01093(蛋白)。荧光定量分析表明板栗短雄花序突变体较正常雄花序的脂质转运蛋白表达量更高。将板栗脂质转运蛋白基因插入到硫氧还蛋白融合表达载体 pET32a(+)中,构建了板栗的原核表达载体 pET-LTP,在大肠杆菌菌株 Rosetta-gamiTM2(DE3)中,IPTG 诱导 5 h 大量表达约为 30 ku 的融合蛋白,通过 Ni2+-chelating sepharose fast flow 柱纯化的融合蛋白具有抑制板栗镰刀菌属病原真菌孢子萌发的功能。