林业科学 ›› 2006, Vol. 42 ›› Issue (6): 26-31.doi: 10.11707/j.1001-7488.20060605
穆立蔷 刘赢男 冯富娟 杨国亭
Mu Liqiang,Liu Yingnan,Feng Fujuan,Yang Guoting
摘要:
分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。2种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了紫椴ISSR-PCR的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Taq酶1.0U,Mg2+ 2.0mmol·L-1,dNTP 0.20mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,1×PCR buffer,30ng模板DNA。在此基础上筛选出14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。