林业科学 ›› 2016, Vol. 52 ›› Issue (1): 55-61.doi: 10.11707/j.1001-7488.20160107
杨桂燕, 郭宇聪, 张凤娇, 赵震, 高彩球
Yang Guiyan, Guo Yucong, Zhang Fengjiao, Zhao Zhen, Gao Caiqiu
摘要: [目的] VHAc基因 (V-ATPase c亚基)是V-ATPase的重要亚基,能响应盐、重金属等胁迫,过表达刚毛柽柳ThVHAc1基因的酵母能提高抗CdCl2耐NaCl能力。本研究拟通过分离ThVHAc1基因不同长度启动子片段并对其胁迫后活性进行分析,以进一步探讨ThVHAc1基因响应CdCl2和NaCl胁迫的机制。[方法] 根据ThVHAc1基因启动子中含有的Dof顺式作用元件的分布,将ThVHAc1基因上游启动子分为205 bp(-1- -205),504 bp(-1- -504)和781 bp(-1- -781)3个不同长度片段。将这些不同长度启动子片段分别替换pCAMBIA1301载体上的CaMV35S启动子,以驱动GUS基因表达,构建植物表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥。对4周龄的T4代转基因拟南芥分别进行H2O(非胁迫处理,对照)、100 mmol·L-1 NaCl和150μmol·L-1 CdCl2胁迫处理,比较不同转基因株系的GUS染色和GUS酶活性。[结果] 正常生长条件下,CaMV35S株系在根、茎、叶中均有GUS染色; 3个启动子片段转基因株系均能在不同组织观察到GUS染色,且在根、茎、叶中有一定差异,但整体上GUS酶活性表现为781> 504> 205。NaCl胁迫下,CaMV35S株系的GUS染色及酶活性与正常生长条件相比无明显变化,但3个启动子片段转基因株系的GUS染色及酶活性均显著降低,且781株系的GUS酶活性分别为205和504株系的2.73和2.07倍;同时,3个启动子片段转基因株系的组织表达特性发生了一些改变,如,504株系在老叶中表达明显增强,嫩叶中减弱,根中无明显变化。CdCl2胁迫下各转基因株系的GUS染色和酶活性变化趋势与NaCl胁迫相似。CdCl2胁迫下, 205,504,781株系的GUS酶活性分别为非胁迫时的52.4%,57.9%和80.9%;胁迫后的组织表达活性也发生了一些改变, 205株系的GUS染色在老叶较深、嫩叶较浅,504株系则在各部分的表达较均匀,781株系大多叶片的GUS表达减弱;但781株系的GUS酶活性仍然最高,分别为205和504株系的2.67和2.07倍。[结论] ThVHAc1基因启动子片段的驱动活性与长度呈正相关;各不同片段启动子在根、茎、叶中的GUS染色及活性具有一定差异,体现在不同启动子片段的表达活性具有一定的组织特异性。NaCl和CdCl2胁迫对ThVHAc1基因启动子的驱动能力具有一定影响,胁迫后各启动子片段转基因株系GUS酶活性均显著降低,但长片段受胁迫的影响程度低于短片段。Dof元件的数量在3个启动子片段中依次减少,表明Dof元件可能对NaCl和CdCl2胁迫有一定的调节作用。同时,NaCl和CdCl2胁迫对ThVHAc1基因启动子的组织表达特性具有一定的影响。
中图分类号: