林业科学 ›› 2002, Vol. 38 ›› Issue (2): 92-97.doi: 10.11707/j.1001-7488.20020216
邵志芳 陈伟元 罗焕亮 叶新丰 张景宁
Shao Zhifang,Chen Weiyuan,Luo Huanliang,Ye Xinfeng,Zhang Jingning
摘要:
通过二次正交旋转组合设计对尾叶桉叶盘愈伤组织分化培养基优化,获得尾叶桉(Eucalyptus urophylia)叶盘外植体的再生植株。将携带外源目的基因的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)与尾叶桉U6无性系叶盘共培养,经愈伤组织诱导、卡那霉素筛选和植株再生,获得20个小芽,再将小芽转入附加卡那霉素(Kam) 40μg·mL-1 的E3-B培养基中诱根,获得8株存活且可再生的转化子。取转化苗叶片作胭脂碱合成酶活性检测电泳后呈阳性;分别以γ-32p-dCTP及地高辛标记柞蚕抗菌肽D基因作探针,与转化苗DNA作点杂交及Southern印迹杂交检测,结果均呈阳性。以上结果表明,柞蚕抗菌肽D基因已整合到尾叶桉基因组中。将从桉树青枯病重病区分离的强毒青枯菌(Pseudomonas spp .)株(991016)以1×109cfu·mL-1 浓度接种转化试管苗,以未经转基因的尾叶桉U6 无性系试管苗为对照,结果表明转化苗接种死亡率56.7% ,对照死亡率为86.7% ,由此可推出导入柞蚕抗菌肽D基因的尾叶桉转化苗明显提高了对青枯菌的抗性。