林业科学 ›› 2012, Vol. 48 ›› Issue (3): 88-94.doi: 10.11707/j.1001-7488.20120314
陈凤毛, 叶建仁, 吴小芹, 黄麟, 谈家金
Chen Fengmao, Ye Jianren, Wu Xiaoqin, Huang Lin, Tang Jiajin
摘要:
将松材线虫RAPD特异片段OPM05-X2100进行分离、回收,与载体pGEM®-T Vector连接,转化大肠杆菌并培养,对目标克隆测序。根据测序结果,用Oligo5.0软件设计引物,正向引物为M05F2(5'-CGGGT CATGG CTGGA GGTAT CGT-3'),反向引物为M05R1(5'-TGGCT CAATG GCAAA TCCTT CGTA-3'),成功地将松材线虫特异片段OPM05-X2100通过引物对M05F2/R1转化为SCAR-M05-X600。运用SCAR标记引物M05F2/R对枯死松树体内分离的92份线虫样本的DNA进行标记,并对单条线虫经简易方法提取的DNA进行检测。结果表明:引物组合对所有81份松材线虫株系均扩增出一条600 bp的清晰、明亮的条带,而对8份拟松材线虫、1份霍夫曼尼伞滑刃线虫、1份大核滑刃线虫、1份长尾属线虫均无扩增产物。该对引物可以检测单条松材线虫。利用这对特异引物组合可构建松材线虫检测试剂盒,实现对松材线虫的快速检测的目标。
中图分类号: