林业科学 ›› 2000, Vol. 36 ›› Issue (1): 28-32.doi: 10.11707/j.1001-7488.20000105
李玲 齐力旺 韩一凡 汪迎春 李文彬
Li Ling,Qi Liwang,Han Yifan,Wang Yingchun,Li Wenbin
摘要:
取在1/2MS+ NAA0.02mg/L 培养基中发育4~6 周的欧洲黑杨转Bt 基因植株15-n-192 试管苗幼叶,在MS+BA0.2 mg/L+NAA0.02 mg/L培养基中培养16h ,分别用基因枪法和叶盘法转化TA29-Barnase嵌合基因,其Barnase 基因的转化率依次为16.1% 和23% ,再生株数分别为175/12 和71/10 。试验表明,选择发育适宜的叶片,利于目的基因转化后的植株再生。进一步用SDS 法提取转基因植株总DNA,经PCR 检测表明:转化植株基因组中扩增出的DNA 片段与Barnase 基因的大小一致;Southern Blot 分析出转化后的欧洲黑杨基因组中携有Barnase 基因片段,进行Dot Blot 检测,转化植株有一明显的杂交斑,并证实为阳性转化植株,并通过试管培养,结合林木常规育种方法,获得了转Barnase 基因的抗虫欧洲黑杨转基因植株。