%A 李晓瑞;胡尚连;曹颖;卢学琴;任鹏;吴晓宇;周美娟 %T 农杆菌介导慈竹4CL基因遗传转化梁山慈竹 %0 Journal Article %D 2012 %J 林业科学 %R 10.11707/j.1001-7488.20120307 %P 38-44 %V 48 %N 3 %U {http://www.linyekexue.net/CN/abstract/article_3531.shtml} %8 2012-03-25 %X

以梁山慈竹2种类型成熟胚的愈伤组织为材料,采用农杆菌遗传介导的方法,将已构建好的具有降低木质素含量的PBI121-4CL-RNAi表达载体导入愈伤组织,探讨愈伤组织预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和温度对遗传转化的影响。研究结果表明,淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织是较好的遗传转化材料。以在愈伤组织培养基上预培养8天的淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织为转化受体,在菌液浓度为 OD600=0.05的EHA105中侵染20 min后,在25 ℃、黑暗条件下共培养2天(共培养基表面加一层无菌滤纸),在含有卡那霉素为55 mg·L-1的抗性筛选培养基上筛选30天,抗性愈伤组织率为90%,经PCR 检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹愈伤组织中。抗性愈伤组织在芽诱导培养基上诱导30天,可获得丛生芽,待丛生芽长至3~5 cm后,在生根培养基上经过20~30天的诱导,可产生1~8条根,获得再生植株。经PCR 检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹再生植株中,获得了转基因植株,转化效率为9%。RT-PCR检测结果表明,转4CL基因的梁山慈竹愈伤组织和植株的内源4CL基因的表达受到抑制,且表达量比对照明显降低。